②PCR、原位杂交、核酸探针

(3)鉴别诊断：Vit缺乏的瘫痪，白痢的结节，淋巴白血病相区别。接种疫苗虽能保护鸡不发生MD，但仍能感染MDV强毒，是否感染MDV不能作为诊断MD的标准。因此必须根据临床疾病和肿瘤标记给出MD的确诊结论。

·羽囊琼脂扩散沉淀试验

1. 羽囊琼脂扩散沉淀试验方法比较简单，用马立克病高免血清检查病鸡羽毛囊中有否病毒存在，以确定诊断。

2. 拔下数根大羽毛，剪下毛根尖端约5mm的小段，放在琼脂板的外围孔内，每只鸡的1-3根羽毛占用一个孔，再将定量的马立克病高免血清放入扩散板的中央孔内，在室温中放置2-3天，最后观察反应结果。

3. 在放羽毛的孔和放血清的中央孔之间，如果出现一条白色不透明的沉淀线，即为阳性反应。

七、防治

1、综合防治措施

(1)加强环境卫生与消毒工作，尤其是孵化场，育雏舍的消毒，努力净化环境，防止维鸡的早期感染

(2)加强饲养管理，增强鸡体的抵抗力对预防本病有很大的作用。环境条件差或某些疾病如球虫病等常是重要诱发因素

(3)坚持全进全出的饲养制度，防止不同日龄的鸡混养于同一鸡舍

(4)防止应激因素和预防免疫抑制疾病(IBD、CAA、腺病毒感染)

2、疫苗接种

(1)正确的选择和使用疫苗

①用于制苗的病毒有三种

i 1型 MDV：人工致弱的MDV(CV1988)

ii2型 MDV：自然不致瘤的MDV(如SB1、Z4)

iii 3型 MDV：(HVT)（如HVT-FC126）。其中以（FC126)经济方便，临床上使用最广泛，但保护率低

②1型和2型只能做细胞苗(病毒与细胞结合的疫苗)，而HVT则可以做冻干苗。

(2)疫苗接种的注意事项

①疫苗接种是防制本病的关键；注苗后隔离，防止出维室和育雏室早期感染起重要作用。

②注苗后三周应与其他鸡群隔离，尤其是头几天疫苗7~10天才产生免疫力，要防止早期感染。

8.马立克氏病免疫失败的原因

(1)鸡群本身与环境因素

①品种的遗传易感性：

某些品种的鸡对马立克氏病有遗传易感性。

②MDV 病毒的严重污染：

我国商品鸡主要饲养地区 MDV 污染十分严重另外，我国所有的商品肉鸡不实施MD免疫。

③MDV的毒力越来越强。

④鸡群的营养与应激：

饲料蛋白质或维生素的缺乏及微量元素硒等都会影响抗体的生成。

经常处于应激状态下的鸡，对接种的疫苗不能产生应有免疫应答。

⑤鸡群潜在感染免疫抑制性病毒。

⑥母源抗体的干扰。

⑦早期感染：

细胞结合苗免疫力产生至少7~10天，冻干苗需10~14天才能产生足够的保护率。

在未产生免疫力之前，野毒的早期感染问题成为免疫失败的主要原因。

(2)疫苗方面的原因

①疫苗的质量不佳

②疫苗的储存与运输不当

③疫苗的反复冻溶，接种剂量不够

④稀释液变质或选择不当

⑤疫苗的稀释剂免疫操作不当

⑥疫苗中抗生素等的添加

总结

1、MD是一种会造成重大经济损失的流行广泛的疾病；

2、MDV具有很强的抵抗力并能在外界环境中长期生存；

3、MD是一种免疫抑制性疾病，常伴有肿瘤病变，它无法被治愈；

4、鸡会长期带毒和排毒(甚至那些接种过的鸡)，有时也可能没有症状，这就导致长期持久的病毒对环境的污染和对其它鸡的感染。

?思考题

·马立克病的流行特点？

·马立克病的临床症状及病理变化？

·马立克病的防制措施？

·马立克氏病免疫失败的原因？